植物種苗團隊-作物特定性狀分子標誌建立及選殖
- 種苗研發成果 @ 農業部

計畫名稱_中文植物種苗團隊-作物特定性狀分子標誌建立及選殖的主辦人_中文是孫永偉, 主辦單位_中文是生物技術課, 計畫編號_中文是101農科-9.1.1-種-X1, 年度是2012, 中文摘要是a.番茄抗斑點萎凋病毒基因型之分子鑑定:。番茄斑點萎凋病毒病,為番茄溫室栽培的主要病害之一,近年更有蔓延的趨勢。危害症狀變化大,從苗期到成株各部位均可感染呈現症狀,Sw5抗性基因控制下接種TSWV的反應呈現無病斑或僅限制性過敏反應。本試驗完成在Sw5基因位置上建立分子標誌並建立Multiplex R....

年度2012
計畫名稱_中文植物種苗團隊-作物特定性狀分子標誌建立及選殖
計畫名稱_英文The establishment and application of specific molecular markers for the crops trait
計畫編號_中文101農科-9.1.1-種-X1
計畫編號_英文101AS -9.1.1-SS-X1
主辦單位_中文生物技術課
主辦單位_英文Biotechnology Section
主辦人_中文孫永偉
主辦人_英文Yung-Wei Sun
中文摘要a.番茄抗斑點萎凋病毒基因型之分子鑑定:。番茄斑點萎凋病毒病,為番茄溫室栽培的主要病害之一,近年更有蔓延的趨勢。危害症狀變化大,從苗期到成株各部位均可感染呈現症狀,Sw5抗性基因控制下接種TSWV的反應呈現無病斑或僅限制性過敏反應。本試驗完成在Sw5基因位置上建立分子標誌並建立Multiplex RT-PCR (含TSWV/Sw5)可同時檢定番茄抗斑點萎凋病毒病的同質抗性、異質抗性或感病性及是否帶有TSWV的病毒。利用F2族群分析抗性基因之分離情形,結果栽培種中之Sw5a與Sw5b抗性基因表現在栽培種中呈現不分離情形,分離比為1:2:1並已運用於大量樣品基因型檢定。利用ELISA及RT-PCR檢測接種TSWV病原植株,以檢定番茄抗斑點萎凋病毒病的同質抗性、異質抗性或感病性的抗病能力,結果同質抗性、異質抗性或感病性檢出病原的比例分別為0%、1.26%及41%。。b.木瓜性別相關基因及其分子標誌之建立:。由DNA層次進行分子標誌的篩選工作,希望能獲得與木瓜全兩性性狀相關之分子標誌。經過多組的SSR及SCAR引子PCR試驗篩選,電泳分析發現:目前所設計之引子對在各試驗材料間,在全兩性株及一般兩性株材料間,並無篩選出具可鑑別全兩性性狀之差異性條帶。進一步將增幅出的條帶進行序列分析,由序列上發現全兩性株與一般兩性株/雄株之間,同個增幅條帶內具有單個核甘酸的差異。這些單個核甘酸的差異是否可發展為SNP或CAPS分子標誌,而應用於全兩性性狀的判定,則需再進行試驗進行篩選測試後,方能由實驗結果來印證。。c. 番茄抗黃化捲葉病毒分子標誌之建立:。番茄黃化捲葉病毒(Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)是由粉蝨傳播的嚴重病害,台灣主要有2種,ToLCTWV (mono-partite,台灣種) 及TYLCTHV(bi-partite,泰國種)。本研究與亞蔬中心合作利用不同育種者之抗感病番茄品種為試驗材料,主要目的在建立黃化捲葉病毒及番茄抗病基因(Ty-3a、Ty-5)分子標誌。結果顯示,引子BGVs可擴增Begomovirus屬病毒(含ToLCTWV及TYLCTHV) 1.6 kb之DNA條帶,引子TY-TH與TY-TW可分別擴增TYLCTHV與ToLCTWV病毒1.6 kb之DNA條帶。近年致病力較強之泰國種病毒發生率呈明顯上升趨勢。已建立抗病基因Ty-3a及Ty-5之SCAR分子標誌,引子Ty3可分別擴增抗病Ty-3、Ty-3a基因320、500及感病ty-3基因250 bp之DNA條帶,引子Ty5可擴增抗病Ty-5及感病ty-5基因750及650 bp之DNA條帶。上述分子標誌可協助育種者早期篩選抗病植株、確認抗病基因型(R/R、R/S、S/S)及病毒感染情形,提高育種效率。。
英文摘要The projects of this program have three components including. The first is the establishment and application molecular markers of the resistance to sport wilt virus in tomato analysis system. Specific markers SCAR-Sw5-1313 and SCAR-sw 5-676 were developed for differentiating allelic variation at Sw5 locus. It amplifies fragments from both resistant and susceptible tomato accessions with different molecular sizes that corresponding to the presence of Sw5/Sw5, Sw5/sw5 and sw5/sw5 alleles.This year we also merged SCAR-Sw 5-1313, SCAR-sw 5-676 and TSWV as Multiplex-PCR through once RT-PCR, detecting Sw5/Sw5, Sw5/sw5, sw5/sw5 and TSWV simultaneously. Sw5a and Sw5b are resistance genes to sport wilt。virus in chromosome 9 of tomato. Genes (Sw 5a and Sw 5b) could be。identified by molecular markers Tss#Sw5a and Tss#Sw5b, respectively. F2 segregation rate of Sw5aSw5b /Sw5aSw5b, Sw5aSw5b/sw5 and sw5/sw5 was 1:2:1. Inoculation experiment of TSWV to 2 F2 populations showed superiority of homo-resistance genotype and hetero-resistance genotype to susceptibility genotype.。The second is establishment the molecular markers for sex determination in Carica papaya L. (papaya) by using SSR and SCAR analysis. In SSR-PCR and SCAR-PCR analysis, we didn't found the maker was specific to allhermaphrodite character. Most of these primers can get a band in male,hermaphrodite and all-hermaphrodite materials. The sequence analysis results of the band were showed single nucleotide differences in male/hermaphrodite or hermaphrodite/ all-hermaphrodite materials. These single nucleotide differences might be applied to SNP or CAPS molecular markers which can detected the all-hermaphrodite character. But it is needed further experimental results to prove it. 。Tomato yellow leaf curl disease is a serious constraint to the production, often causing 100% yield loss. In Taiwan, the disese is caused by the monopartite Tomato leaf curl Taiwan virus (ToLCTWV) and the bipartite Tomato yellow leaf curl Thailand virus (TYLCTHV). The main disease resistance genes identified include Ty-1, 2, 3,,3a, 4 and 5. In this study, we have developed the method with AVRDC for specific detection of TYLCTHV and ToLCTWV, and molecular markers for resistance genes Ty-3a and Ty-5. The results showed we has been established BGVs,TY-TH, TY-TW molecular marker could be amplified Begomovirus, ToLCTWV and TYLCTHV virus 1.6 kb of DNA band. Primer Ty3 could amplify resistance genes Ty-3 and Ty-3a 320 bp and 500 bp and susceptibility gene ty-3 250 bp of DNA bands. Resistance gene Ty-5 and susceptibility gene ty-5 could be amplified by Ty5 molecular marker 750 bp and 650 bp of DNA bands. The molecular markers could help breeders early screening and confirmation disease resistant plant genotypes (R / R, R / S, S / S), helping to accelerate the breeding and promotion of disease-resistant tomato lines.。

年度

2012

計畫名稱_中文

植物種苗團隊-作物特定性狀分子標誌建立及選殖

計畫名稱_英文

The establishment and application of specific molecular markers for the crops trait

計畫編號_中文

101農科-9.1.1-種-X1

計畫編號_英文

101AS -9.1.1-SS-X1

主辦單位_中文

生物技術課

主辦單位_英文

Biotechnology Section

主辦人_中文

孫永偉

主辦人_英文

Yung-Wei Sun

中文摘要

a.番茄抗斑點萎凋病毒基因型之分子鑑定:。番茄斑點萎凋病毒病,為番茄溫室栽培的主要病害之一,近年更有蔓延的趨勢。危害症狀變化大,從苗期到成株各部位均可感染呈現症狀,Sw5抗性基因控制下接種TSWV的反應呈現無病斑或僅限制性過敏反應。本試驗完成在Sw5基因位置上建立分子標誌並建立Multiplex RT-PCR (含TSWV/Sw5)可同時檢定番茄抗斑點萎凋病毒病的同質抗性、異質抗性或感病性及是否帶有TSWV的病毒。利用F2族群分析抗性基因之分離情形,結果栽培種中之Sw5a與Sw5b抗性基因表現在栽培種中呈現不分離情形,分離比為1:2:1並已運用於大量樣品基因型檢定。利用ELISA及RT-PCR檢測接種TSWV病原植株,以檢定番茄抗斑點萎凋病毒病的同質抗性、異質抗性或感病性的抗病能力,結果同質抗性、異質抗性或感病性檢出病原的比例分別為0%、1.26%及41%。。b.木瓜性別相關基因及其分子標誌之建立:。由DNA層次進行分子標誌的篩選工作,希望能獲得與木瓜全兩性性狀相關之分子標誌。經過多組的SSR及SCAR引子PCR試驗篩選,電泳分析發現:目前所設計之引子對在各試驗材料間,在全兩性株及一般兩性株材料間,並無篩選出具可鑑別全兩性性狀之差異性條帶。進一步將增幅出的條帶進行序列分析,由序列上發現全兩性株與一般兩性株/雄株之間,同個增幅條帶內具有單個核甘酸的差異。這些單個核甘酸的差異是否可發展為SNP或CAPS分子標誌,而應用於全兩性性狀的判定,則需再進行試驗進行篩選測試後,方能由實驗結果來印證。。c. 番茄抗黃化捲葉病毒分子標誌之建立:。番茄黃化捲葉病毒(Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)是由粉蝨傳播的嚴重病害,台灣主要有2種,ToLCTWV (mono-partite,台灣種) 及TYLCTHV(bi-partite,泰國種)。本研究與亞蔬中心合作利用不同育種者之抗感病番茄品種為試驗材料,主要目的在建立黃化捲葉病毒及番茄抗病基因(Ty-3a、Ty-5)分子標誌。結果顯示,引子BGVs可擴增Begomovirus屬病毒(含ToLCTWV及TYLCTHV) 1.6 kb之DNA條帶,引子TY-TH與TY-TW可分別擴增TYLCTHV與ToLCTWV病毒1.6 kb之DNA條帶。近年致病力較強之泰國種病毒發生率呈明顯上升趨勢。已建立抗病基因Ty-3a及Ty-5之SCAR分子標誌,引子Ty3可分別擴增抗病Ty-3、Ty-3a基因320、500及感病ty-3基因250 bp之DNA條帶,引子Ty5可擴增抗病Ty-5及感病ty-5基因750及650 bp之DNA條帶。上述分子標誌可協助育種者早期篩選抗病植株、確認抗病基因型(R/R、R/S、S/S)及病毒感染情形,提高育種效率。。

英文摘要

The projects of this program have three components including. The first is the establishment and application molecular markers of the resistance to sport wilt virus in tomato analysis system. Specific markers SCAR-Sw5-1313 and SCAR-sw 5-676 were developed for differentiating allelic variation at Sw5 locus. It amplifies fragments from both resistant and susceptible tomato accessions with different molecular sizes that corresponding to the presence of Sw5/Sw5, Sw5/sw5 and sw5/sw5 alleles.This year we also merged SCAR-Sw 5-1313, SCAR-sw 5-676 and TSWV as Multiplex-PCR through once RT-PCR, detecting Sw5/Sw5, Sw5/sw5, sw5/sw5 and TSWV simultaneously. Sw5a and Sw5b are resistance genes to sport wilt。virus in chromosome 9 of tomato. Genes (Sw 5a and Sw 5b) could be。identified by molecular markers Tss#Sw5a and Tss#Sw5b, respectively. F2 segregation rate of Sw5aSw5b /Sw5aSw5b, Sw5aSw5b/sw5 and sw5/sw5 was 1:2:1. Inoculation experiment of TSWV to 2 F2 populations showed superiority of homo-resistance genotype and hetero-resistance genotype to susceptibility genotype.。The second is establishment the molecular markers for sex determination in Carica papaya L. (papaya) by using SSR and SCAR analysis. In SSR-PCR and SCAR-PCR analysis, we didn't found the maker was specific to allhermaphrodite character. Most of these primers can get a band in male,hermaphrodite and all-hermaphrodite materials. The sequence analysis results of the band were showed single nucleotide differences in male/hermaphrodite or hermaphrodite/ all-hermaphrodite materials. These single nucleotide differences might be applied to SNP or CAPS molecular markers which can detected the all-hermaphrodite character. But it is needed further experimental results to prove it. 。Tomato yellow leaf curl disease is a serious constraint to the production, often causing 100% yield loss. In Taiwan, the disese is caused by the monopartite Tomato leaf curl Taiwan virus (ToLCTWV) and the bipartite Tomato yellow leaf curl Thailand virus (TYLCTHV). The main disease resistance genes identified include Ty-1, 2, 3,,3a, 4 and 5. In this study, we have developed the method with AVRDC for specific detection of TYLCTHV and ToLCTWV, and molecular markers for resistance genes Ty-3a and Ty-5. The results showed we has been established BGVs,TY-TH, TY-TW molecular marker could be amplified Begomovirus, ToLCTWV and TYLCTHV virus 1.6 kb of DNA band. Primer Ty3 could amplify resistance genes Ty-3 and Ty-3a 320 bp and 500 bp and susceptibility gene ty-3 250 bp of DNA bands. Resistance gene Ty-5 and susceptibility gene ty-5 could be amplified by Ty5 molecular marker 750 bp and 650 bp of DNA bands. The molecular markers could help breeders early screening and confirmation disease resistant plant genotypes (R / R, R / S, S / S), helping to accelerate the breeding and promotion of disease-resistant tomato lines.。

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主辦人_中文: 郭孄婷 | 主辦單位_中文: 品種改良保護課 | 計畫編號_中文: 102農科-9.2.2-種-X4 | 年度: 2013 | 中文摘要: 春石斛為國內具經濟栽培及種苗外銷潛力的新興蘭科作物,本試驗擬利用量化之壯苗指數及營養元素測定進行春石斛蘭成熟株生理指標建立,以三個品種根據尾葉及株高區分四組,調查結果顯示,株高、莖節數、葉數、地上部鮮...

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